材料与方法水冲洗直至冲洗液澄清然后在显微镜下观察染色情况 必要时可通过再次复染或使用盐酸酒精分色处理 反向脱水 将冲洗好的切片置于梯度酒精溶液中依次进行脱水 在浓度分别为 的酒精中各浸泡分钟 用二甲苯液 中浸泡 分钟 在二甲苯 中浸泡 分钟 行透明处理 切片烘干后用中性树胶封片 即可观察染色结果 在
材料与方法水冲洗直至冲洗液澄清然后在显微镜下观察染色情况 必要时可通过再次复染或使用盐酸酒精分色处理 反向脱水 将冲洗好的切片置于梯度酒精溶液中依次进行脱水 在浓度分别为 的酒精中各浸泡分钟 用二甲苯液 中浸泡 分钟 在二甲苯 中浸泡 分钟 行透明处理 切片烘干后用中性树胶封片 即可观察染色结果 在步骤 溶液代替一抗作为阴性对照 其余操作步骤同前。 法的具体步骤 研磨组织 冰袋将高温消毒的研钵围绕 使研钵处于一个低温的环境 低温冰箱中迅速取一小块质量约为的组织放入研钵中研磨 研磨时要连续加入液氮 使组织维持一个极低的温度 防止组织中 的降解。当组织呈细颗粒状时 加入 接着研磨直至组织呈粉末状完全研碎。 分离 水处理过的管中加入研碎的组织 常温下静置大约 分钟后向组织中加入 的氯仿 剧烈震荡混匀后再次常温静置 分钟 经离心机离心 分钟 设置 所需要的即存在在离心后的上清液中。 沉淀 将上清液转移到另一个经 水处理过 并向管中加入异丙醇 上清液与异丙醇体积比值为 管中的混合液颠倒混匀后常温下接着静置分钟 最后用离心机离心 分钟 设置 洗涤保留离心后的沉淀物 加入 水配制的 冷乙醇 颠倒混匀后离心 分钟 设置 室温晾干。溶解 水中保存于一 冰箱内或继续实验。 测定 浓度 样品加入 之间为所需纯度 浓度计算公式如下 提取 浓度 等于 乘于稀释倍数材料与方法 反应 按以下反应体系加入 进行后续扩增其余保存于 冰箱内。 扩增 反应产物弘按以下体系加入 其中以磷酸甘油醛脱氢酶为反应内参 根据 设计引物序列。引物序列如下 名称上游引物和下游引物扩增片段 扩增条件如下预变性 个循环 变性 采用 各自适合的温度退火延伸 个循环总延伸 扩增产物与缓冲液混合后加入琼脂糖凝胶的加样孔中以电压 进行电泳。 染色 在紫外线投射仪下观察电泳条带。用 图像记录分析系统进行分析 目的基因 的表达量以目的基因的 条带和 条带灰度值比值计算。材料与方法 结果判定 免疫组化 法结果判定于光学双目显微镜下选取每张切片中细胞染色与背景着色对比比较清晰的视野进行观察 并于 倍镜下随机选择细胞阳性表达比较集中的 个视野区域用来进行阳性细胞 判定标准为 细胞呈现棕黄色或棕褐色 的研究。以积分光密度作为测量指标 每张切片通过图像分析系统进行分析 最终以阳性区积分光密度值 的平均值作为该切片的测定值。 结果判定用 图像记录分析系统对在紫外线投射仪下观察的电泳条带进行分析 目的基因 表达量的计算公式 目的基因 的表达量 目的基因的 条带灰度值 条带灰度值统计学方法采用 统计学软件包进行分析 标准差表示所得数据 定量资料的比较采用单因素方差分析 当方差不齐时采用秩和检验 两变量之间关联性分析采用 相关分析方法 检验水准 组间两两比较 对检验水准进行校『 较次数 结果结果 蛋白在息肉组、息肉旁内膜组及对照组中的表达 蛋白的阳性表达产物在显微镜下观察为棕黄色染色 息肉组及息肉旁内膜组中的 蛋白主要在腺上皮细胞的胞浆、胞核中表达 间质细胞胞浆部分表达 对照组中的 蛋白主要表达于腺上皮细胞的胞浆中见附图 。在息肉组中蛋白的平均积分光密度值为 息肉旁内膜组中 蛋白的平均积分光密度值为 对照组中 蛋白的平均积分光密度值为 蛋白在息肉组中呈高表达在对照组中呈低表达或不表达 息肉旁内膜组中 蛋白表达强度介于量组之间 其差异均有统计学意义伊 见表 蛋白在不同组织中的表达情况注与对照 与息肉旁内膜组 筹异有统计学意义对照组息肉旁内膜组息肉组组织类别图 蛋白在不同组织中积分光密度值 蛋白在息肉组、息肉旁内膜组及对照组中的表达蛋白的阳性表达产物在显微镜下观察为棕黄色染色 主要在腺上皮细胞胞浆中表达 问质细胞胞浆部分表达 见附图 。在息肉组中蛋白的平均积分光密度值为 息肉旁内膜组中 蛋白的平均积分光密度值为 对照组中 蛋白的平均积分光密度值为 蛋白在息肉组中呈高表达在对照组中呈低表达或不表达 息肉旁内膜组中 蛋白表达强度介于两组之间 其差异均有统计学意义 见表 蛋向在不同组织中的表达情况注与对照组 与息肉旁内膜组 差异有统计学意义。 黧对照红息肉旁内膜组息肉组图 蛋白在不同组织中的积分光密度值 在息肉组、息肉旁内膜组及对照组中的表达 在息肉、息肉旁内膜及对照组中均有表达 结果范围内可见清晰的电泳条带见附图 。对其灰度值进行统计分析 在息肉组中 的表达量为 息肉旁内膜组中 在息肉组及息肉旁内膜组中高表达与对照组比较 均有显著性差异佃 息肉组中 的表达高于息肉旁内膜组 其差异具有统计学意义 见表 在不同组织中的表达情况注与对照组 与息肉旁内膜组 差异有统计学意义。 霸息肉组图在不同组织中的灰度值 在息肉组、息肉旁内膜组及对照组中的表达 在息肉、息肉旁内膜及正常内膜中均有表达 范围内可见清晰的电泳条带见附图 。对其灰度值进行统计分析 在息肉组 结果中 的表达量为 息肉旁内膜组中 的表达量为 对照组中 的表达量为 在对照组中低表达而在息肉组中高表达 在息肉旁内膜组中 表达强度介于二者之间 其差异均有统计学意义 在不同组织中的表达情况注与对照组 与息肉旁内膜组 差异有统计学意义。 口对照组鹫息肉旁内膜坌且一息肉组图 在不同组织中的灰度值 子宫内膜息肉患者息肉组织中 关联性分析。通过统计软件对实验数据处理 相关分析结果显示 息肉组中 蛋白呈正相关见图 在息肉组中的表达水平呈正相关见图 结果‘三生至 蛋白与蛋白的相关性分析 的相关性分析讨论 讨论子宫内膜息陵 作为妇科常见疾病 可发生在青春期后的任何年龄 岁为高发年龄近年 随着超声及宫腔镜检查技术的发展 其发病年龄呈年轻化趋势。子宫内膜息肉多为良性病变 占总发病率的 左右 。其临床表现多为子宫异常出血 有时会出现下腹坠胀、骨盆痛、白带增多、性交后出血等症状。此外 不孕是子宫内膜息肉对育龄期妇女另一个严重危害【引。国外文献报道子宫内膜息肉在不孕症患者中约有 的发病率 国内研究发现不明原因的不孕症患者约有 伴有子宫内膜息肉的发生 。也有一些单发较小的子宫内膜息肉无任何临床症状。而围绝经期和绝经后的子宫内膜息肉患者存在发展为腺瘤样增生的可能 甚至有恶变的风险 有文献报道子宫内膜息肉的恶变率为 。目前子宫内膜息肉的治疗以宫腔镜电切术 为主 术后给予预防感染及激素药物辅助支持治疗但仍存在 的复发率 引。子宫内膜息肉作为妇科常见病及多发病 严重影响广大患者的生活质量及生育要求。近年来 关于子宫内膜息肉的发病机制国内外的专家学者已经进行了大量的研究 从炎症介质、转化生长因子的异常表达、雌孕激素受体对子宫内膜敏感性失常到雌孕激素受体的基因多态性以及癌基因、抑癌基因调控失衡等各个角度进行深入的研究探讨 但是至今仍没有达成共识。大多学者认为子宫内膜息肉可能是炎症、免疫、内分泌、细胞凋亡失衡的综合结果。在对子宫内膜息肉发病机制的研究中 许多学者最终将其归结于子宫内膜反应性增生及血管的生成。对于引起子宫内膜反应性增生及血管形成的原因 传统观点认为与慢性炎症有关 亦有学者认为相对过高的雌激素环境可能参与了子宫内膜息肉的发生。但随着对雌孕激素的深入研究 人们发现如果靶细胞受体表达出现异常或缺乏 该激素的生理功能仍不能正常发挥作用。在内膜组织中 雌激素参与子宫内膜增生和血管形成等生理过程。而孕激素则通过促使内膜向分泌期转化来抑制子宫内膜增生。 研究发现与对照组比较内膜息肉组织中的孕激素受体表达降低 雌激素受体表达升高 但也有研究发现子宫内膜息肉组织中间质细胞的 表达均下降推测在子宫内膜周期性变化过程中 子宫内膜息肉的间质可能对雌孕激素受体的敏感性发生了改变 子宫内膜局部异常 讨论的内分泌环境参与了子宫内膜病理生理的改变。子宫内膜随月经周期发生增殖 分化 脱落 增殖的周期性变化 除了需要雌孕激素规律性的周期调节外 其再生修复过程必然需要大量细胞因子的参与。当促进子宫内膜再生修复的细胞因子异常表达时 子宫内膜也会发生病理改变。有相关文献报道子宫内膜息肉的发病机制与血管内皮生长因子 、碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子 】等有关。细胞凋亡及其调控基因的平衡表达对月经周期『常更替起着重要作用。细胞凋亡抑制基因 是子宫内膜息肉中研究最多的凋亡相关因子 它能够延长细胞寿命 增加细胞数目。而 作为一种凋亡调节基因则能够阻止细胞存活。当 形成同源二聚体时诱导细胞凋亡 形成异源二聚体时则发挥 抑制细胞凋亡的功能【 。有研究发现 异常与子宫内膜息肉的发生有关【因此 有学者认为子宫内膜息肉属于良性瘤变的范畴。 概述及与子宫内膜息肉的关系 概述 最早发现于活化的 淋巴细胞 因其能够抑制巨噬细胞的移动而得名。一直以来 被认为是一个神秘的细胞因子 随着对其深入研究 人们发现 是一种多效能的蛋白分子。 作为自然免疫的校准器 能够活化巨噬细胞的功能 促进巨噬细胞分泌多种细胞因子 参与炎症免疫反应。 除是一个促炎症因子外 还具有酶得特性 并可作为促生长因子在增殖、分化及胚胎发育方面发挥重要作用 基因由三个外显子和两个内含子组成位于 号染色体上 。在启动区有两个多态性位点监管该基因 第一个位点在 反复重复 的区域此区域也含有 转录因子的结合位点 另一个位点是一个单一的多态性核苷酸 位置可以激活某些肿瘤细胞中的 的表达 并增加血清中 的比例【 蛋白分子质量为含有 个氨基酸残基 是一个由 链组成的三维晶体结构。激活后可形成一个分子质量为 同型三聚体 自身依赖互变异构酶活性和氧化还原酶活性发挥生物学作用 】。但其发挥作用的具体方式至今仍在探索 可能通过自分泌
NFκB及MIF在育龄期妇女子宫内膜息肉中的表达NF,κB,B,MIF,及其在,中表达,子宫内膜,中的表达,MIF在,反馈意见
本站文章于2019-11-05 22:42，互联网采集,如有侵权请发邮件联系我们，我们在第一时间删除。 转载请注明：资料与步骤水冲洗直至冲洗液澄清然后正在显微
